高性能疏水色譜柱是生物制藥領域分離分析的關鍵工具,其核心原理基于溶質(zhì)分子與固定相間疏水相互作用的差異。以納譜分析的BioCore HIC系列為例,該系列包含Butyl、Phenyl和OH三款色譜柱,均采用單分散大孔硅膠微球基質(zhì),通過先進的表面鍵合與修飾技術實現(xiàn)高柱效和低非特異性吸附。其中,BioCore HIC-Butyl針對單抗偶聯(lián)藥物(ADC)的DAR值測定進行優(yōu)化,具有高回收率和批次間一致性;BioCore HIC-Phenyl適用于ADC藥物不同組分的分離,展現(xiàn)優(yōu)異的選擇性;而BioCore HIC-OH則專注于雙抗和融合蛋白的分離,通過獨t表面修飾工藝降低非特異性吸附。
1、分離性能方面
高選擇性:能夠基于樣品分子疏水性的差異,精準地實現(xiàn)不同物質(zhì)的分離。例如對于單抗偶聯(lián)藥物分子(ADC)等復雜生物分子體系,可有效區(qū)分其不同組分,如納譜分析BioCore HIC-Butyl色譜柱對單抗偶聯(lián)藥物分子就具有良好的選擇性。
高柱效:先進的填料技術,如單分散大孔硅膠微球或特殊聚合物基質(zhì)等,使得色譜柱具有高的柱效,能夠提供更尖銳、對稱的峰形,從而提高分離的準確性和分辨率,如TSKgel HIC-ADC Butyl色譜柱采用丁基鍵合無孔親水性聚合物基質(zhì)為填料,可實現(xiàn)高效的分離。
2、穩(wěn)定性方面
良好的化學穩(wěn)定性:可在較寬的pH范圍內(nèi)保持穩(wěn)定,一般能耐受一定的酸性和堿性條件,部分產(chǎn)品pH適用范圍可達2-8甚至更寬,如納譜分析BioCore HIC系列色譜柱pH范圍為2-813。同時,對有機溶劑也具有良好的耐受性,能在含有有機溶劑的流動相中正常使用。
熱穩(wěn)定性好:通常具有較高的耐溫上限,一般在60℃左右,能夠適應不同的實驗和操作環(huán)境,保證在較高溫度下仍能維持較好的分離性能和柱子的穩(wěn)定性。
機械穩(wěn)定性強:耐壓上限較高,可承受較高的壓力,如一些色譜柱耐壓上限可達6000psi,能夠滿足高效液相色譜等高壓操作的要求,確保在高流速下也能穩(wěn)定運行,延長柱子的使用壽命。
3、其他方面
低非特異性吸附:通過獨t的表面修飾工藝或化學設計,能夠有效降低生物大分子與固定相之間不利的相互作用,減少非特異性吸附,提高目標物質(zhì)的回收率,如納譜分析BioCore HIC系列色譜柱采用先進的鍵合技術,最大限度地降低了生物大分子與固定相間的非特異性吸附。
良好的批次間一致性:嚴格的生產(chǎn)工藝和質(zhì)量控制體系,保證了不同批次生產(chǎn)的色譜柱具有高度一致的性能,確保實驗結(jié)果的重現(xiàn)性和可靠性,如納譜分析每批次BioCore HIC-Butyl填料都按照嚴格的質(zhì)量管理體系生產(chǎn),使用相關生物大分子質(zhì)檢以確保分離性能和批次間一致性。
廣泛的應用范圍:適用于多種類型的樣品分離,包括生物技術、生物制藥領域中的蛋白質(zhì)、抗體、多肽等生物大分子,以及一些有機小分子等,如Sepharose Fast Flow HIC介質(zhì)廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)和多肽的分離純化。
